grönt fluorescerande protein (gfp) är ett slags bioluminescerande protein, som finns i koelenterater. gfp är lätt att upptäcka, hög känslighet, stabila fluorescensegenskaper, stark tolerans, lätt att uttrycka, utan cytotoxicitet, som används för levande celldetektering. därför kan gfp användas som en reportergen för att detektera genuttryck eller -reglering eller som en fusionsmärkning för att detektera lokalisering, migrering, konformationsförändring och intermolekylär interaktion av proteinmolekyl eller riktade markör några organeller. Den maximala toppen av gfp-absorptionsspektrumet är 395 nm (uv) och med en 470 nm sekundär absorptionstopp (blå stråle). Utsläppspektrets maximala topp är 509 nm (grön stråle) och med en sidostopp på 540 nm (shouder). Endast 450nm-490nm är adderingsabsorptionsspetsen för gfp, men eftersom excitationsljuset minskar cellerna, används bandet oftare oftare (främst 488nm). Dessutom liknar spektrumegenskaperna hos gfp fluoresceinisotiocyanat (fitc), båda två har vanligtvis en uppsättning filter. gfp-fluorescens är extremt stabil. Under excitationsljuset är förmågan hos gfp fotoblekning starkare än fluorescein. i synnerhet är den mer stabil vid den blå strålvågn av 450nm-490nm. På liknande sätt är känsligheten av fluorescensen hos gfp-fusionsproteinet högre än den fluorescerande antikroppen av fluorokrommärkning, är stark anti-ljusblekningsförmåga, vilket är mer lämpligt för kvantitativ bestämning och analys. genereringen av gfp-fluorescens behöver inte något exogent reaktionssubstrat. därför är gfp som ett allmänt tillämpat levande reporterprotein, dess effekt oöverträffad av något annat enzymreporterprotein. gfp är emellertid inte enzym. fluorescenssignalen har ingen enzymatisk amplifieringseffekt. så, känsligheten av gfp är kanske lägre än andra enzym reporter protein, som firefly luciferase.

sätten att observera gfp:

1.portabel gfp excitation ljuskälla

Användning av bärbar gfp excitation ljuskälla är den mest bekväma och snabbaste observationsmetoden (kallad fluorescerande proteinobservationsspegel). eftersom gfp har en högre absorptionstopp på 470nm, med användning av 470nm exciterande ljuskälla kan stimulera gfp för att avge ljusgrön fluorescens. Vi måste bära professionellt observationsglas för att observera den tydliga fluorescenssignalen när vi observerar gfp fluorescens . Anledningen är excitation ljus är intensivt blått ljus.

2.uv ljuskälla

använder UV-ljuskälla (kallad UV-lampa , svart ljuslampa) observation är också mycket bekvämt. men om du observerar växten fluorescerar lövgrönt av växtlöv under ultraviolett ljus. det kommer att störa för gfp fluorescens . Dessutom kan proverna också skada gfp-proverna under UV-ljus.

3.fluorescensmikroskop

fluorescensmikroskop baseras på UV som ljuskälla, används för att bestråla det detekterade objektet, gör det fluorescerande och observerar sedan formen och placeringen av objektet under ett mikroskop. fluorescensmikroskop används för att undersöka absorptionen av intracellulära substanser, transport, distribution och lokalisering av kemiska ämnen. vissa ämnen i cellen, som lövgrön, kan fluoresceras efter bestrålning av ultraviolett ljus. andra ämnen, fluorescerar inte i sig, men om du färgar det med ett fluorescerande färgämne eller en fluorescerande antikropp kan du också fluorescera med ultraviolett ljus. fluorescensmikroskop är ett av verktygen för kvalitativ och kvantitativ forskning om sådana ämnen. För närvarande använder den populära metoden fluorescensmikroskopobservation. fluorescensmikroskop är mycket populärt i laboratoriet. men den enda bristen är att skivorna av löv eller djur måste samlas in för observation, vilket kommer att förstöra de odlade exemplen och kan inte observera viviperception.

omfattande analys är det den snabbaste och bekväma metoden att observera gfp genom att anta bärbar gfp excitation ljuskälla (kallad transgen bios-cope).